Pewarnaan Bakteri #3: Pewarnaan Sederhana

Pewarnaan differensial adalah pewarnaan dengan menggunakan lebih dari satu jenis reagen warna. Bagaimana dengan pewarna sederhana? Mengapa namanya sederhana? 

Lihat lagi artikel mengenai bioteknologi (klik judul)

Pewarna sederhana adalah metode pewarnaan bakteri yang hanya menggunakan satu jenis reagen. Metode ini tidak serumit metode pewarnaan differensial, tetapi memiliki fungsinya sendiri. Jadi penting juga.

Apa saja metode pewarnaan sederhana itu?

Metode pewarnaan sederhana digunakan untuk menentukan letak, mortalitas, dan morfologi bakteri dalam sampel. Pewarna yang digunakan adalah reagen basa seperti kristal violet, malachite green, methylene blue, atau nigrosin. 

Untuk kali ini, akan dibahas metode pewarnaan sederhana dengan methylene blue dan nigrosin. 

A. Pewarnaan sederhana: Methylene Blue 

Metode 

Persiapan 

1. Semprotkan kaca objek dengan etanol 70% dan keringkan dengan tisu kering. 
2. Dengan tusuk gigi, pindahkan mikroorganisme secara aseptik dan aduk pada tetesan air.

Pewarnaan

1. Teteskan setetes methylene blue 
2. Tutup dengan kaca penutup 

Pengamatan

1. Preparat diamati di bawah mikroskop dari perbesaran rendah hingga perbesaran total 400X. 
2. Untuk pengamatan ini, tidak diharuskan hingga perbesaran total 1000X.

Science Fact: How does it happen that way? 

Bakteri akan berwarna biru dengan konsistensi yang berbeda. 

Methylene blue adalah garam metiolen klorida biru yang terdisosiasi dalam air menjadi ion methylene blue positifdan ion klorida negatif. Karena sitoplasma bakteri bermuatan negatif dalam medium ber-pH mendekati netral, ion methylene blue akan berikatan dengan komponen sitoplasma. Hal ini membat bakteri berwarna biru. 

Sel hidup akan berwarna biru pucat dan pada sel mati berwarna biru terang. Biru pucat terjadi karena enzim dehidrogenase sel yang hidup menguraikan pewarna methylene blue sehingga berwarna biru pucat. Karena sel mati tidak memiliki enzim dehidrogenasi, tidak ada yang mengurai pewarna.  

Saccharomyces cerevisiae
sumber: dokumen pribadi  

B. Pewarnaan negatif: Nigrosin
Metode
Pewarnaan

1. Semprotkan kaca objek dengan etanol 70% dan keringkan dengan tisu kering.
2. Teteskan nigrosin pada kaca objek.  
3. Dengan tusuk gigi, pindahkan mikroorganisme ke kaca objek dan aduk dengan nigrosin.
4. Gunakan kaca objek lain sebagai spreader. Gerakan spreader mendekati campuran.
5. Ketika campuran tersebar pada ujung spreader, gerakan ke arah yang berlawanan dari gerakan spreader sebelumnya.
6. Lapisan tipis yang terbentuk ditunggu kering. 

Pengamatan

1. Amati di bawah mikroskop dengan perbesaran lensa terlemah ke terkuat. 
2. Pengamatan cukup hingga perbesaran total 400X. 

Science Fact: How does it happen that way?
Bakteri berwarna transparan, tetapi kaca objek berwarna hitam

Pewarnaan negatif berguna dalam pengamatan bentuk bakteri. Reagen yang digunakan seperti Nigrosin bermuatan negatif karena terdiri dari suspensi karbon yang bermuatan negatif. Karena reagen bermuatan negatif dan membran sel bermuatan negatif, nigrosin tidak akan masuk ke sel. Jadi hanya mewarnai kaca objek.

A: Escherichia coli (basil); B: Bacillus subtilis (basil) 
sumber: dokumen pribadi 

Semoga artikel ini membantumu :)
Lihat lagi artikel mengenai bioteknologi (klik judul)

Special thanks: 

Danish A.

D. Juvi

Elbert H.

Jeff S.

M. Nova

Referensi:

Truckee Meadows Community College. 2013. Negative Stains. Retrieved  from Truckee Meadows Community College Online Microbiology Resource Center: http://biolabs.tmcc.edu/Micro%20Web/NegativeStain.pdf (14 Mei 2015).

Truckee Meadows Community College. 2013. Simple Stain. Retrieved from Truckee Meadows Community College Online Microbiology Resource Center: http://biolabs.tmcc.edu/Mic ro%20Web/SimpleStain.pdf (14 Mei 2015).

Rossbach, S. 2001. Negative Stain Results. Retrieved from Western Michigan University: https://homepages.wmich.edu/~rossbach/bios312/LabProcedu res/Negative%20stain%20results.html (14 Mei 2015).

Hicks, D. R. 2015. Negative Staining. Retrieved from Los Angeles City College: http://faculty.lacitycollege.edu/hicksdr/negative_staining.htm (14 Mei 2015).

Baker, K. H. 2001. Stains. Retrieved from The Pennsylvania State University http: //www.personal.psu.edu/faculty/k/h/khb4/enve301/301labs/Lab2_Simple_staining.html (14 Mei 2015).